经常有客户问到，液相色谱仪进空白的时候出现鬼峰，是什么原因造成的呢?本文就造成液相色谱仪的原因展开讨论。
首先，我们要了解等度和梯度的现象不一样，所以下面的讨论要分两个部分进行展开。
一、等度色谱
首先让我们定义一下问题中的空白，如果你进的是流动相，那么就不应该有峰，但是如果是其他的，例如你通常溶解样品的溶液，那么有峰出现是正常的。除流动相外的任何溶液都会干扰流动相和固定相之间的平衡，从而导致峰出现。
回收流动相
如果流动相中的组分有轻微保留，就会表现为保留峰，这些峰可能是正峰或倒峰。如果你回收了流动相并且使用了一段时间，你就会发现在你平常进样时样品峰的位置会有一个倒峰。前面进的样品聚集在回收溶剂里，固定相表面也部分覆盖着分析物。当你进新鲜配置的流动相或者其他的溶剂时，样品组分就会浓度不足(相对于含样品的溶液来说)，这个浓度不足沿柱子流动，速度与其相应的峰一样，这样与通常色谱相反的图谱就出现了。这个现象叫做空穴色谱，这些峰叫做空穴峰。这是不回收流动相的其中一个原因。
过载和沉淀
液相色谱仪如果进的样是和流动相一样，就要跳出柱子和流动相之外看看。例如可能是上一次过载引起的。看看自动进样器的洗针能否工作，手动的话确认注射器是否彻底清洗干净，针筒外面也要洗。
会不会是前面的样品组分沉淀或吸附在进样器上?如果是这样，那么每次进样后这个峰就会减小。确保样品所有组分都能溶于流动相，的解决办法是用流动相溶解样品。
流路产生
液相色谱仪每一次进样都伴随着一次压力脉动。如果在流路中有死角，例如压力仪的T型接头等，压力脉动会把死角的溶液带到流路中来，呈现为一个峰。通常这种峰比色谱图中的峰要宽。检查一下流路，尽量不留死角。
二、梯度色谱
上面的原因适用与等度色谱，如果你是运行梯度，会有一些其他原因导致空白溶液中出峰。
溶液杂质
液相色谱仪流动相中的微小成分和杂质会在柱子的初始比例平衡过程中富集在柱子上，当梯度中流动相洗脱能力变大时，这些东西会象样品一样从柱子上脱离。如果你的流动相有很多杂质，出来的图谱就会有很多的峰。问题的主要来源是水。水有很多途径带来杂质，包括净化系统本身，存储容器和细菌生长等等。水净化系统要经常用反相梯度的空白基线来监视。另外，推荐购买HPLC级的水。
即使使用高质量的溶液和溶剂，还是可能会检测到由溶剂本身导致的峰。这取决于你用的检测器，如果你用的是紫外检测器，就取决于检测波长以及检测器对流动相折射率改变的敏感性。使用高质量的溶剂，梯度背景更象一个圆包而不是一堆峰。
含蛋白质的样品
如果用反相色谱分析含蛋白质的样品，也有可能在空白中发现峰，它是由之前的进样带来的。峰面积会在接下来的空白梯度中迅速减小。除非没有进样，否则这种现象表明样品在进样器中过载了。进样器甚至可能会被弄掉线。这是由于有些蛋白质在开始的梯度中不完全溶解造成的。例如在特定条件下只有2/3的卵蛋白素溶解在开始的梯度中，在接下来的每一次梯度中都有大概相同数量的卵蛋白素溶解到流动相中，经过几次运行之后卵蛋白素的含量就变的微乎其微了，这种现象就是很典型的由蛋白质造成的。在我的印象中，还没有发现过小分子化合物有这种现象。
综上所述，发现问题后要善于总结原因，找到原因后对症下药，才能快速准确解决问题。
