高效液相色谱法,在早期采用分部收集柱有色洗脱液后,用分光法和滴定法进行测定。20世纪60年代,随着气相色谱系统理论与实践经验应用于液相色谱理论研究,多种高效微粒填充剂被研制成功,采用细粒度高效柱,大大提高了液相色谱的分离能力。与此同时,以高压输液泵替代重力作用,更加快了液相色谱的分析速度。而以柱分离技术与光学检测器相结合使得液相色谱法发展成为可以同时完成分离分析目的的重要分析方法。新式电子积分仪代替模拟积分器及之后的电子计算机,使色谱图的数据处理精度得到了进一步提高。高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)就是在上述这些发展的基础之上诞生的一种现代最重要的分析技术。液相色谱的高效是以柱的高压、分离过程的高速为前提的,所以高效液相色谱法也称之为高压液相色谱法或高速液相色谱法。
HPLC法已成为一种重要的分离分析手段,并获得了广泛的应用。在药物分析中,HPLC法占有极其重要的地位,据估计,70%左右的药品标准中的含量测定采用HPLC方法。此外,在体内药物分析、药品生产过程、新产品研发等方面,HPLC法也是主要的分析手段。
与气相色谱法相比,HPLC法有很多优点:
1.HPLC柱所用的固定相粒度很小(10μm以下),因此它的分离效率很高。
2.HPLC中的流动相可以选择不同极性的液体,由于它与固定相都能对组分产生一定的亲和力,从而提高了分离效率。另外,也使得对固定液的选择变得简单,只需选择几种极性不同的固定液即可解决实际分离问题。
3.HPLC法可以应用于高沸点、热稳定性差、摩尔质量大的化合物的分离分析,这些化合物占了有机化合物中的绝大多数。而气相色谱仅限于分离分析低沸点的化合物及气体。
4.HPLC可以在室温条件下进行分析,而气相色谱一般都要在较高温度下进行。
HPLC法也有一定的缺点,主要是仪器设备相对昂贵,溶剂需要严格纯化。